Né à Pavie, Ambrogio Maestri étudie le piano et le chant sous la direction d’Umberto Grilli. Sa carrière internationale a démarré en 2001, lorsqu'il fait ses débuts dans le rôle-titre de Falstaff à La Scala de Milan et au Teatro Verdi de Busseto (rôle dont il a célébré sa 250e représentation au Staatsoper de Vienne en 2016). À La Scala de Milan, Ambrogio Maestri a ensuite débuté dans des rôles emblématiques de Verdi tels que Jago (Otello), Renato (Un bal masqué), Don Carlo di Vargas (La Force du destin) et Giorgio Germont (La Traviata). Il s’est produit sur les grandes scènes lyriques internationales, dont le Metropolitan Opera de New York, l'Opéra national de Paris, le Royal Opera House de Londres, le Staatsoper de Vienne, le Deutsche Oper de Berlin. Son répertoire comprend le Baron Scarpia (Tosca), Amonasro (Aida), les rôles-titres de Simon Boccanegra, Rigoletto, Nabucco, Don Pasquale, ainsi que Gérard (Andrea Chénier), Dulcamara (L'Élixir d'amour) et Mamma Agata (Viva la Mamma). Ambrogio Maestri a travaillé avec des chefs d'orchestre tels que Zubin Mehta, Riccardo Chailly, Daniele Gatti, Daniel Oren, Fabio Luisi, Antonio Pappano, Christian Thielemann, Jeffrey Tate, James Levine, Nello Santi, Marcello Viotti, Marco Armiliato, Gianandrea Noseda et Daniel Harding. Il a également travaillé avec des metteurs en scène comme Franco Zeffirelli, Robert Carsen, Graham Vick, Peter Stein, Bob Wilson, Laurent Pelly, Mario Martone, Hugo De Ana, Bartlett Sher, Damiano Michieletto, Davide Livermore et bien d’autres. Au cours de la saison 2023-2024, Ambrogio Maestri interprète les rôles-titres de Don Pasquale et de Gianni Schicchi au Staatsoper de Vienne, le Baron Scarpia (Tosca) à Tokyo et Nagoya, Dulcamara au Bayerische Staatsoper de Munich, le rôle-titre de Don Pasquale à La Scala de Milan et Michonnet (Adriana Lecouvreur) à au Gran Teatre del Liceu de Barcelone.

À l’Opéra national de Paris : L'Élixir d'amour (Dulcamara), 2006, 2007, 2015, 2021 ; Rigoletto (rôle-titre), 2008 ; Falstaff (rôle-titre), 2013